是指单位体积培养液中菌体的含量。
常用的菌体浓度测定方法(细菌计数方法)主要有以下几种:
这是一种非常简单的检测方法,我们可以使用计数板或计数器直接获得细菌数量。
首先制备细菌悬液,取一定体积的样品细菌悬液置于细菌计数板的计数池内,用显微镜观察计数。根据计数室刻度内的细菌数,计算样品中的含菌数。
特点:所需设备简单,测量结果准确,结果快速,计数时观察研究微生物的形态特征。无法区分是否为细菌,无法区分活细菌和死细菌。
单位:个/mL
(1)25×16的计数板:
细菌数量为每毫升=(100小格中的细胞数/100)×400×1000×稀释倍数
(2)16×25的计数板:
细菌数量为每毫升=(80小格中的细胞数/80)×400×1000×稀释倍数
电子计数器也属于直接计数法,其工作原理类似于血细胞分析仪,测量孔中液体的电阻变化,孔只能通过细菌,当细菌通过孔时,电阻显著增加,形成脉冲,并在电子记录装置上自动记录。
计数单位:个//mL
特点:该方法的测定结果更准确,但它只能识别颗粒的大小,而不能区分它是否是细菌。因此,细菌悬液中不需要任何碎片。
常用的有平板菌落计数法(cfu方法),其原理是每一种活细菌都能在适当的培养基和良好的生长条件下形成菌落。取一定容量的细菌悬液,制成几个不同的10倍递增稀释液,然后从每个稀释液中取出1倍mL将其放置在灭菌容器中,与营养琼脂培养基混合,在一定温度下(一般为48小时),根据稀释倍数记录每个容器中形成的菌落数量mL原样中活细菌的总数。
特点:该方法灵敏度高,是临床微生物检测中最常用的活菌计数方法。前两种方法包括所有的活细菌和死细菌,但这种方法只计算活细菌。
计数单位:cfu/mL(cfu是菌落形成单位,是指在固体培养基上生长繁殖的单个菌体或多个菌体,称为菌落形成单位,是计算细菌或霉菌数量的单位。cfu/mL指每毫升样品中的细菌菌落总数。菌落形成单位的计数方法不同于前两种计数方法。前两种方法将计算所有活细菌和死细菌,但该方法计算活细菌)。
比浊度法又称浊度测定法。这是一种光散射测量技术,用于通过悬浮质点介质的光强来测量悬浮物质的浓度。常用的方法有:
McFarland根据硫酸和氯化钡的比例,发明了一种用于微生物比浊度的标准浊度管。
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0.1 |
0.2 |
0.4 |
0.6 |
0.8 |
1 |
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4.9 |
4.8 |
4.6 |
4.4 |
4.2 |
4 |
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1.5 |
3 |
6 |
9 |
12 |
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0.5ml氯化钡(1.17%)加入99.5ml硫酸(1%),所得溶液浊度即为0.5麦氏单位。0.5麦氏浓度菌液是临床微生物药敏实验常用浓度,通常认为,如将配菌液浓度配成0.5麦氏比浊管时,相当于1.5×108细菌数/mL)。
麦氏比浊管可以自己配制,也可购买商品化标准麦氏比浊管,将制备的菌悬液与标准麦氏比浊管比较,与多少麦氏浊度的浊度相同即为多少麦氏浓度的菌液。
特点:该方法实际上为目视比浊法,使用肉眼观察浊度,误差较大。
单位:mcf(即麦氏浊度单位)。
是一种采用麦氏比浊法的自动化分析仪器,以其灵敏、准确、快捷的优点逐渐取代人工法成为细菌浊度测定的主要工具。麦氏比浊仪测量细菌溶液样品并直接显示麦氏单位浊度值,根据国际通用麦氏单位浊度值与细菌数的关系即可换算出细菌浓度。
特点:简便快捷,但只能检测含有大量细菌的悬浮液,得出相对的细菌数目,对颜色太深的样品,不能用此法测定。
单位:mcf(即麦氏浊度单位)。
当光束通过悬浊液时, 由于被散射或吸收而降低其透过量,细菌悬浊液的浓度在一定范围内与光密度成正比,与透光度成反比,这就是光电比浊法的依据。常用的有分光光度计法。
特点:此方法简单快捷,但只能检测含有大量细菌的悬浮液,得出相对的细菌数目,对颜色太深的样本,不能用此方法。
单位:OD值(光密度)。
此法分为是干重法和湿重法。此法分为湿重法和干重法。湿重法系单位体积培养物经离心后将湿菌体进行称重;干重法系单位体积培养物经离心后,以清水洗净放人干燥器加热烘干,使之失去水分然后称重。
特点:此法适于菌体浓度较高的样品,是测定丝状真菌生长量的常用方法。
单位:mg/mL
氮、碳是细胞的主要成分,含量较稳定,测定氮、碳的含量可以推知细胞的质量。
特点:此法适于细胞浓度较高的样品。
ccu是颜色改变单位,以微生物在培养基中的代谢活力为指标,根据培养基颜色的改变来计数微生物数量的单位。
以解脲脲原体为例:
1、取12只无菌试管,每一管装1.8mL解脲脲原体培养基。
2、在第一管加入0.2mL待测解脲脲原体菌液,充分混匀,从中吸取0.2mL加入第二管,依次类推,10倍梯度稀释,一直到最末一管。
3、37℃培养,以培养基颜色改变的最末一管作为待测菌液的CCU,也就是支原体的最大代谢活力,比如第六管出现颜色改变,他的相对浓度就是10的6次方CCU/mL,即106CCU/mL。
特点:这种方法通常用于很小,用一般的比浊法无法计数的微生物,比如支原体等,因为支原体的液体培养物是完全透明的,呈现为清亮透明红色,因此无法用比浊法来计数;而由于支原体固体培养很困难,用cfu法也不容易计数,所以需要用特殊的计数方法,即CCU法。
单位:ccu/mL