影响 PCR 体系蒸发的三大因素

提及 PCR 实验中有没有这样的问题？

假阳性

非特异性扩增

数据重复性差

假阴性

拖尾

无扩增产物

样本降解

事实上，造成这些结果的原因有很多，如引物质量差、模板质量差、退火温度不合适等，但也存在一个不容忽视的问题——PCR 体系蒸发。

聚合酶链反应（PCR）需要依赖 PCR 仪器控制各反应阶段的温度和加热时间 PCR 通常需要通过反应 20～40 二次加热加热和冷却的温度循环，试剂蒸发和损失等过程带来的反应对许多 PCR 实验结果影响显著，检测灵敏度高 qPCR 实验中还影响透光性，从而导致结果不准确。

那么，影响 PCR 系统蒸发的因素有哪些？

1.热盖压力和温度

为了防止 PCR 试剂在高温反应中向上挥发，PCR 该仪器通常覆盖试液孔板上方的热盖单元，以减少试剂的挥发。但热盖能完美地解决蒸发问题吗？

PCR 仪器的热盖大致可分为以下四种：非可调热盖、可调热盖、自适应热盖和自动热盖。而「可调热盖」用手拧紧会导致试剂蒸发。一些制造商通过增加热盖压力来减少边缘蒸发，但这种方法并不能完全消除这种现象。有时，如果拧得太紧，可能会压碎管道和旋钮。有些仪器甚至会因拧得太紧而导致试剂蒸发。一些制造商通过在热盖上添加软导热材料来解决这个问题，但目前，软导热材料的使用寿命尚不清楚。

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